基本性质中文名称P70 核糖体蛋白 S6 激酶底物肽CAS 号171783-08-7单字母序列RRRLSSLRASTSKS三字母序列Arg-Arg-Arg-Leu-Ser-Ser-Leu-Arg-Ala-Ser-Thr-Ser-Lys-Ser分子式C64H121N27O21分子量1604.84外观白色冻干粉末常为三氟乙酸盐形式靶点p70 S6 激酶p70S6KRPS6KB1属于 mTOR 下游丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶该多肽为 p70S6K 经典体外多肽底物序列中多个 Ser、Thr 位点可被激酶磷酸化。溶解性易溶于纯水、中性 Tris 或磷酸盐缓冲液在偏碱性环境长期放置肽键易水解弱酸性条件稳定性较好。结构式结构特征该多肽共 14 个氨基酸残基序列来源于核糖体 S6 蛋白天然磷酸化区域。N 端连续三个精氨酸构成碱性富集区是 p70S6K 识别、结合底物的关键基序序列内部包含 Ser-Ser 核心磷酸化位点同时附带 Thr 与多个 Ser 残基可发生多位点磷酸化与天然 S6 蛋白的磷酸化模式高度相似。 p70S6K 属于 AGC 激酶家族底物识别偏好 N 端碱性氨基酸紧邻磷酸化位点。该底物相比短肽底物保留了天然 S6 蛋白的多位点磷酸化特征更贴近体内真实磷酸化模式但同时也会被 RSK、ROCK 等部分同源激酶微弱识别实验设计时需要设置对照。作用机理p70S6K 是 mTOR 信号通路下游关键效应激酶接受 mTORC1 磷酸化激活。在体外激酶反应体系ATP 作为磷酸供体活化的 p70S6K 可以将 ATP 上 γ- 磷酸基团转移至本多肽的 Ser/Thr 羟基上产生磷酸化多肽产物。 实验体系中可采用同位素 ³²P 标记、ELISA、质谱、荧光偏振等检测手段定量测定磷酸化产物生成量以此计算 p70S6K 酶活性评估化合物对 p70S6K 的抑制能力。该多肽仅作为体外生化工具底物无法穿透细胞膜不进入活细胞内调控 mTOR 信号通路。应用领域p70S6K 体外激酶活性测定重组 p70S6K 酶活检测、细胞裂解液内源性 S6K 激酶活性免疫沉淀实验是 mTOR 通路研究最常用的底物肽之一。小分子抑制剂高通量筛选用于筛选靶向 p70S6K 的小分子化合物测定候选抑制剂 IC50评估化合物抑制效力。AGC 激酶家族底物特异性研究对比 p70S6K、SGK、AKT、RSK 等激酶的底物偏好研究激酶识别序列规则。mTOR 信号通路基础科研肿瘤、代谢、细胞增殖相关机制研究配套生化实验用于评估雷帕霉素类药物对 S6K 激酶活性的影响。药物研发p70S6K 是 mTOR 通路下游靶点与肿瘤细胞增殖、血管生成、代谢紊乱、衰老密切相关。该多肽主要用于体外高通量筛选 p70S6K 小分子抑制剂先导化合物评估候选分子对 p70S6K 的抑制活性。 该多肽本身不具备直接成药潜力多肽分子细胞膜穿透能力差体内易被蛋白酶快速降解半衰期短仅作为生化筛选工具。p70S6K 药物开发方向集中于小分子抑制剂利用该多肽构建体外激酶筛选体系筛选抗肿瘤、抗纤维化候选药物。研究进展p70S6 激酶底物肽基于核糖体 40S 亚基 S6 蛋白天然磷酸化区域设计最早在上世纪 80 年代开发后续一直作为 mTOR/S6K 通路体外生化实验的标准底物。早期文献利用该多肽证实生长因子、胰岛素通过 mTOR 激活 p70S6K进而调控 S6 蛋白磷酸化、促进核糖体蛋白翻译。 近年研究大量使用该底物肽筛选选择性 p70S6K 抑制剂用来区分 mTOR 直接抑制和下游 S6K 特异性抑制带来的生物学效应研究者也可对该多肽 N 端进行生物素、荧光标记简化磷酸化产物检测规避放射性同位素操作。储存规范冻干粉末密封干燥避光-20℃保存稳定期可达 3 年4℃环境只能短期存放防潮避免吸潮。水溶液分装单次使用小体积-80℃可稳定保存约 6 个月-20℃储存不超过 1 个月4℃仅适合短期放置。严禁反复冻融反复冻融会造成多肽降解引入杂肽干扰激酶活性检测结果。